Conceitos Básicos em Cromatografia Liquida | HPLC

A cromatografia Líquida / HPLC é uma técnica utilizada na separação dos componentes de uma amostra, os quais se distribuem em duas fases, uma estacionária e a outra móvel.
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A fase estacionária pode ser um sólido, um líquido retido sobre um sólido, ou um gel.
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A fase móvel pode ser líquida ou gasosa.
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O objetivo da cromatografia é separar individualmente os diversos constituintes de uma mistura de substâncias seja para identificação, quantificação ou obtenção da substância pura para os mais diversos fins.
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A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE ou HPLC) é um método de separação de compostos químicos em solução, para realização desta separação necessitamos no processo cromatográfico da partição dos componentes de nossa amostra entre a fase móvel (FM) e a fase estacionária (FE).
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No HPLC temos a capacidade de realizar separações e análises quantitativas de uma grande quantidade de compostos presentes em vários tipos de amostra, com alta resolução, eficiência e sensibilidade, mas o sucesso desta separação cromatográfica só é possível se for aplicada uma FM correta a uma FE conveniente.

Aplicação do HPLC

É uma técnica utilizada em análises de compostos não voláteis ou instáveis termicamente onde a cromatografia gasosa não pode ser utilizada.
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Como cerca de 80% dos compostos apresentam essas características, o campo de aplicação do HPLC é extremamente vasto, principalmente para as análises realizadas nas Indústrias Farmacêuticas, com a quantificação dos insumos farmacêuticos e medicamentos, bem como o doseamento de impurezas e produtos de degradação em matérias-primas e produtos acabados.
 
A cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE ou HPLC) é um método de separação de compostos químicos em solução, onde o sucesso da separação cromatográfica só é possível se for aplicada uma fase móvel (FM) correta a uma fase estacionária (FE) conveniente.

O que é a fase estacionária e a fase móvel?

A parte fixa é a fase estacionária e o eluente é a parte móvel (fase móvel), sendo que a diferença de polaridade dos componentes da sua amostra, proporcionarão a estes constituintes interações diferentes com a FE e a FM.
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A FE é constituída de partículas sólidas empacotadas em uma coluna, a qual é atravessada pela FM que é liquida. São as forças físicas e químicas que atuam entre os solutos e as duas fases que são responsáveis pela retenção dos solutos sobre a coluna cromatográfica.
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A diferença na magnitude dessas forças que determina a resolução e portanto a separação dos solutos individuais.

Componentes do cromatógrafo líquido

Com relação aos componentes do cromatógrafo líquido temos no geral as seguintes partes: reservatório da FM, bomba, injetor, coluna cromatográfica, detector e aquisição/registro de dados.
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  •  Reservatório da FM: recipiente contendo a FM que será bombeada para dentro do equipamento;

 

  • Bomba: sistema de bombeamento para que a FM consiga migrar com vazão constante através da FE;

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  • Injetor: realiza a injeção da amostra no sistema com precisão e exatidão adequada;

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  •  Coluna cromatográfica: onde esta presente a FE, no qual acontece a separação;

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  • Detector: dispositivo conectado na saída da coluna onde emite um sinal elétrico, o qual é registrado de maneira continua a composição do eluente, gerando um cromatograma.
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